核酸法檢測(cè)支原體的有點(diǎn)顯而易見(jiàn)：便捷、高效、準(zhǔn)確率高、靈敏度高。核酸法分為普通PCR法和qPCR法。這兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，也各有適應(yīng)場(chǎng)景。

常規(guī)法PCR檢測(cè)試劑盒——Venor®GeM Classic

該試劑盒可以通過(guò)常規(guī) PCR 對(duì)研究和工業(yè)中的細(xì)胞培養(yǎng)上清液、培養(yǎng)基和生物制藥中的支原體污染進(jìn)行快速、可靠和省時(shí)的常規(guī)監(jiān)測(cè)。

細(xì)胞培養(yǎng)物和培養(yǎng)基成分中的支原體（柔膜菌綱：支原體、無(wú)膽原體、螺旋體）物種都是通過(guò)高度保守的 rRNA 操縱子擴(kuò)增來(lái)特異性檢測(cè)的，或者更具體地說(shuō)，通過(guò)擴(kuò)增支原體基因組中的 16S rRNA 編碼區(qū)來(lái)特異性檢測(cè)。在265-278 bp處檢測(cè)到支原體特異性擴(kuò)增。通過(guò)使用提供的內(nèi)擴(kuò)增對(duì)照（在191 bp處檢測(cè)到），可以排除由于PCR抑制劑或DNA提取不當(dāng)引起的假陰性結(jié)果。

優(yōu)點(diǎn)：便捷成本低

缺點(diǎn)：無(wú)法定量

qPCR檢測(cè)試劑盒——Venor®GeM qEP

支原體熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上，將『針對(duì)支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記，使PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號(hào)的變化和配套軟件，進(jìn)行DNA擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR。

優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、特異性強(qiáng)、時(shí)間短，2-3小時(shí)出結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果可定量，操作簡(jiǎn)便

缺點(diǎn)：

對(duì)于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。（可用培養(yǎng)法做補(bǔ)充驗(yàn)證）

不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內(nèi)在設(shè)計(jì)不同），需謹(jǐn)慎選擇，盡量在專(zhuān)業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。

『支原體qPCR檢測(cè)試劑盒』介紹

德國(guó)MB公司生產(chǎn)的支原體qPCR檢測(cè)試劑盒（均為探針?lè)z測(cè)），依據(jù)操作步驟的細(xì)微差別， 分『經(jīng)典法』和『一步法』兩種。

此兩類(lèi)試劑盒較全球其他廠家同類(lèi)產(chǎn)品，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性，一次檢測(cè)即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測(cè)到107種支原體物種。操作簡(jiǎn)單，易于觀察（使用MB的試劑盒，下表中列出的支原體物種均為陽(yáng)性，其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性，無(wú)交叉反應(yīng)）。